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產(chǎn)品名稱:CA1080 支原體檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):CA1080

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):CA1080 支原體檢測(cè)試劑盒
本試劑盒的原理是利用熒光染料(bisbenzimide,Hoechst 33258)檢測(cè)支原體污染。
CA1080-100

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CA1080CA1080 支原體檢測(cè)試劑盒的詳細(xì)資料:

CA1080 支原體檢測(cè)試劑盒

保存:4℃保存,有效期為2年,Hoechst工作液需要避光保存。
產(chǎn)品內(nèi)容:
Hoechst 33258工作液
50ml
固定液
50ml
抗熒光衰減封片液
10ml
說明書
1份
CA1080 支原體檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本試劑盒是利用熒光染料(bisbenzimide,Hoechst 33258)檢測(cè)支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域,因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn),即為支原體的DNA染色斑,說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。
操作步驟:
貼壁細(xì)胞:
1、被檢細(xì)胞接種于無(wú)菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,接種密度為1-2×104。同時(shí),接種正常無(wú)支原體感染的同種細(xì)胞,作為陰性對(duì)照。
2、5天后,先吸去培養(yǎng)液,再加入1ml的固定液,靜置20min,
3、吸去固定液,晾干。
4、于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15-20min或室溫靜置20~30min。
5、吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml滅菌超純水洗滌三次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液,并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
懸浮細(xì)胞:
1、收集需檢測(cè)的細(xì)胞,1500rpm,5min。
2、將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,再加1ml的固定液,靜置20min。
3、吸去固定液,晾干。
4、于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15~20min或室溫靜置20~30min。
5、吸去Hoechst 33258工作液,用無(wú)菌水洗滌玻片3次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液,并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。

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