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產(chǎn)品名稱:通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)

產(chǎn)品型號:RP1100

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)適用于各種 RNA制品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)以及隨后的PCR擴(kuò)增。它采用M-MLV進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),能夠獲得較長的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。同時,在20ul反轉(zhuǎn)錄體系和50ul PCR反應(yīng)體系中,還可以一次性得到足夠量的PCR產(chǎn)物用于后續(xù)的克隆實驗

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RP1100通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)的詳細(xì)資料:

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)產(chǎn)品簡介

莫洛尼鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MLV RT)是一種RNA依賴的DNA聚合酶,能使mRNA>5kb)轉(zhuǎn)錄為cDNA。M-MLV RTRNase H活性相對于禽成髓細(xì)胞瘤病毒反轉(zhuǎn)錄酶較弱,更適合用來反轉(zhuǎn)錄較長的mRNA。M-MLV RT應(yīng)用于以RNA為模板合成cDNA的*條鏈。

注意:M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反轉(zhuǎn)錄酶,因此要得到和用AMV 反轉(zhuǎn)錄酶一樣產(chǎn)量的cDNA需加入更多單位的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)使用方法

1)使用方法簡介以用2mgRNA為例。在無RNase離心管中,加入0.5mg引物含總RNA的樣品中,總體積不大于15ml。70℃,5分鐘打開模板鏈形成的二級結(jié)構(gòu)。立即放于冰上降溫防止二級結(jié)構(gòu)恢復(fù),隨后短暫離心使液體集中在離心管底。

2)加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。

注意:不要改變引物的加入比率。

M-MLV 5×Reaction Buffer                                      5ml

dATP10mM                                                          1.25ml

dCTP10mM                                                          1.25ml

dGTP,10mM                                                          1.25ml

dTTP10mM                                                          1.25ml

Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor         25 units

M-MLV RT                                                              200 units

無核酸水后體積 25ml

3)輕輕混勻離心管,如果使用隨機(jī)引物在37℃孵育60分鐘,其他引物則42℃孵育。延伸溫度在3742℃之間佳。

4)M-MLV RT 用于合成cDNA的*鏈。往后的合成則需要根據(jù)需要自行設(shè)計引物再次合成。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)Buffer組成

M-MLV RT 5×Reaction Buffer

250mM     Tris-HCl(PH 8.3 室溫下)

375mM     KCl

15mM     MgCl2

50mM     DTT

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)來源

大腸桿菌表達(dá)純化

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)保存條件

-20℃保存。避免經(jīng)常凍融。

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