CA1080 支原體檢測試劑盒 solarbio
貨號：CA1080
保存：4℃保存，有效期為2年，Hoechst 工作液需要避光保存。
產品內容：
Hoechst 33258 工作液 100mL 200mL
固定液 100mL 200mL
抗熒光衰減封片液 20mL 40mL
說明書 1 份 1 份
產品簡介：
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染，這種染料會結合到DNA 的A-T 富集區(qū)域，因為支原體的DNA 中A-T 含量高（55%～80%），所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經(jīng)染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA 染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258 的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm；
Hoechst 33258 和雙鏈DNA 結合后，大激發(fā)波長為352nm，大發(fā)射波長為461nm。
操作步驟：
貼壁細胞：
1. 被檢細胞接種于無菌的6 孔細胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。
2. 5 天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1mL 的固定液，靜置20min，
3. 吸去固定液，晾干。
4. 于每孔中，加入1mL 的Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細胞），
37℃避光放置15-20min 或室溫靜置20～30min。
5. 吸去Hoechst 33258 工作液，加入2mL 滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片
液，并以蓋玻片覆蓋。
6. 熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
懸浮細胞：
1. 收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。
2. 將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1mL 的固定液，靜置20min。
3. 吸去固定液，晾干。
4. 于每孔中，加入1mL 的Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細胞），
37℃避光放置15～20min 或室溫靜置20～30min。
5. 吸去Hoechst 33258 工作液，用無菌水洗滌玻片3 次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以
蓋玻片覆蓋。
6. 熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
結果判斷（參考）：
陰性：僅見細胞的細胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽性：除細胞外，細胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項：
1. Hoechst 工作液對人體有害，請注意防護。
2. 固定液有刺激性氣味，建議在通風櫥進行固定。
3. 支原體檢測時，好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2～3 代，這樣容易避免假陰性結果。
4. 本試劑盒用于6 孔板檢測時，可以進行50 次檢測反應。
5. 檢測支原體污染，可以使用支原體Vero 細胞，這樣可以提高檢測靈敏度，即將被檢測樣品
接種于Vero 細胞進行檢測。
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